许崇友 韩 勇
1.山东省日照市东港区动物疫病预防控制中心，山东东港 276800；
2.山东省日照市动物疫病预防控制中心，山东日照 276800
2021年8月2日，山东畜牧兽医局印发《山东省重点动物疫病监测净化工作方案（2021 版）》，要求推进全省重点动物疫病监测净化，提高规模养殖场管理水平和疫病防控能力，推动动物疫病防控从稳定控制到净化消灭转变。2021年10月7日，农业农村部下发《关于推进动物疫病净化的意见》，要求推进动物疫病净化工作，力争通过5年时间，在全国建立一批高水平的净化场。
自非洲猪瘟在我国发生以来，种猪已成为当前养猪业的稀缺资源，如何做好非洲猪瘟防控，对主要猪病开展净化，提高猪群健康水平，是种猪场急需解决的问题。日照市种猪品种较多，既有国外引进品种大白长白等瘦肉型品种，又有地方优良品种五莲黑猪。国外大白长白等品种引入国内后由于饲养环境、净化技术等原因，PRRS、PRV、PCV、PPV 等主要疫病感染不容乐观。五莲黑猪是日照市的优良地方猪种，因原产于日照市五莲县而得名，1975年命名为五莲黑猪，属肉脂兼用型。五莲黑猪具有耐粗饲、繁殖力高、抗病力强、肉质好、杂交优势明显等特点[1]。五莲黑猪作为地方猪种先后被列入1999年10月出版的《山东省畜禽品种志》，2010年5月入选山东省畜牧兽医局公布的《山东省畜禽遗传资源保护名录》。20 世纪80、90年代，由于外来品种的引进和杂交改良，五莲黑猪感染PRV、PCV、PPV 等垂直传播病的病例逐渐增多，净化工作刻不容缓。
为从源头上控制疫病，保护和振兴地方猪种资源，2019年起，日照动物疫病预防控制中心选择2家五莲黑猪种猪场，2 家国外瘦肉型大白和长白种猪场，按照国家和省的要求开展规模猪场主要疫病净化工作，推动疫病从有效控制向净化消灭转变。本试验通过3年持续监测，了解种猪场ASF、CSF、PRRS、PRV、PCV、PPV 主要病原感染状况，为净化提供技术支撑。
1.1 样品类型和数量
选择种猪场4 家，包括五莲黑猪原种场2 家，国外瘦肉型大白和长白种猪场2 家。原种猪场按照置信水平95%，预期流行率3%，每次采样不少于100 份。祖代、父母代按照置信水平95%，预期流行率6%，每次采样不少于50 份。样品来源每个种猪场不少于4 栋猪舍的猪只，种公猪、经产母猪和后备母猪要兼顾一定比例。每头猪采集血清、抗凝血和扁桃体，并一一对应。
1.2 样品采样和处理方法
1）血清。每头猪用促凝血管采血5 mL，室温静置30 min 后，3 000 r/min 离心3～5 min，取上层血清1.0～1.2 mL 放1.5 mL 离心管中，在离心管盖上编号。
2）抗凝血。每头猪用抗凝血管采集血3 mL，室温静置30 min 后，在采样管上编号。采集抗凝血与血清样品一一对应。
3）扁桃体。利用扁桃体采样器（鼻捻子、开口器和采样枪）采样。采样器使用前先用3%氢氧化钠溶液消毒，再用纯净水冲洗。首先固定活猪的上唇，用开口器打开口腔，用采样枪采取扁桃体样品，用灭菌牙签挑至灭菌1.5 mL 离心管并作好标记。采集扁桃体与血清、抗凝血样品一一对应。
1.3 检测试剂
猪瘟病毒实时荧光RT-PCR 试剂盒、猪蓝耳病毒实时荧光RT-PCR 试剂盒、猪圆环病毒实时荧光RT-PCR 试剂盒、猪细小病毒实时荧光RT-PCR 试剂盒购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。猪瘟病毒抗体ELISA 试剂盒、猪伪狂犬病毒gE、gB 抗体ELISA 试剂盒、猪蓝耳病毒抗体ELISA 试剂盒、猪圆环病毒抗体ELISA 试剂盒、猪细小病毒抗体ELISA 试剂盒购自武汉科前有限公司。
1.4 主要仪器设备
核酸提取仪购自西安天隆公司，实时荧光PCR仪购自美国ABI 公司，酶标仪购自美国MD 公司，离心机购自Sigma 公司等。
1.5 方 法
1）病原检测。采集的扁桃体样品，提取病毒核酸，采用荧光定量RT-PCR 方法，检测ASF、CSF、PRRS、PRV、PCV、PPV 病毒核酸。采集抗凝血，提取病毒核酸，采用荧光定量PCR 方法，检测ASF。采集血清进行PRV-gE 抗体检测。操作严格按照试剂盒说明书进行。
2）免疫抗体效果检测。采集的血清进行CSF、PRRS、PRV-gB 抗体检测，操作严格按照试剂盒说明书进行。
2.1 病原学监测
1）不同年份感染情况。2019-2021年连续3年的监测结果显示，4 个种猪场ASF、CSF、PRRS、PRV、PCV、PPV 总体阳性率呈下降趋势。4 个种猪场均未检测到ASFV、CSFV 核酸阳性，说明ASF、CSF 在日照市种猪场得到较好净化，净化效果明显。只有1 个猪场在2020年检测到PRRSV，提示日照市种猪场PRRSV 感染风险仍存在。PRV、PCV、PPV在2019 和2020年均全部感染，2021年虽然降为75%，但感染仍较严重，应引起足够重视（表1）。
2）各个猪场感染情况。2019-2021年连续3年监测结果显示，每个猪场ASF、CSF、PRRS、PRV、PCV、PPV 的个体阳性率呈下降趋势，说明监测净化取得了较好的效果。原种场的个体阳性率总体小于祖代场，祖代的个体阳性率总体小于父母代。4 个种猪场均未检测到ASFV、CSFV 核酸阳性，只有1 个猪场在2020年检测到PRRSV。其中，PRV-gE、PCV、PPV 阳性率整体呈下降趋势，但污染面仍较广，全部种猪场均检测到PCV、PPV 核酸阳性，感染较严重。其中五莲黑猪场的PCV 和PPV 感染率较高，可能与近年来引种有关，需进一步加强净化力度（表2）。
2.2 免疫抗体效果监测
对采集的血清样本进行免疫效果检测，2019-2021年连续3年监测结果显示，各年份CSF、PRRS、PRV 抗体水平差距不大，合格率均超过70%，达到保护要求。CSFV 抗体水平高于PRRSV、PRV 抗体；
PRV 抗体水平偏低，需要加强免疫。2018年非洲猪瘟在我国发生以来，猪场高度重视生物安全，但对CSF、PRRS、PRV 等的免疫稍有松懈，猪场主要疫病抗体水平均不高，应引起足够重视（表3）。
3.1 净化总体情况
2018年8月，非洲猪瘟在我国部分地区暴发，对我国养猪业产生了巨大的冲击[2]。非洲猪瘟没有疫苗，需要采取严格的生物安全措施。2011-2018年，王琴[3]开展CSF 病原学监测，发现健康猪群带毒率从9.26%下降到0.7%，表明我国CSFV C 株疫苗保护效果较好，CSF 得到有效控制，具备开展净化条件。目前我国PRRS 流行情况较复杂，部分猪场感染严重。王倩等[4]对2015-2018年安徽省定点猪场主要疫病病原进行检测，发现PRRSV 平均阳性率为26.9%。2019-2021年连续3年日照市动物疫病预防控制中心对4 个种猪场进行监测，均未检测到ASF、CSF 病原，PRRS 只在2020年检测到1 次。免疫效果监测结果表明CSF、PRRS 抗体水平均超过70%，能够对猪群提供较好的保护。说明经过多年的监测净化，日照市种猪场ASF、CSF、PRRS 防控取得了一定成效，具备开展ASF、CSF 净化条件。
PRV、PCV、PPV 近年来在种猪场感染较严重，临床多表现为混合感染，且都能垂直传播至下一代，引起母猪繁殖障碍、生长缓慢等症状，造成更大范围的感染，给养猪业造成巨大经济损失[5]。本研究结果表明，日照市种猪场PRV、PCV、PPV 感染较严重，尤其五莲黑猪地方品种，个体感染率达10%以上，需要进一步采取生物安全、免疫、消毒等措施，净化PRV、PCV、PPV。
3.2 地方品种五莲黑猪感染较严重
近年来，由于国外品种的大量引入，地方品种猪感染PRV、PCV、PPV 的报道越来越多，本次监测结果也表明，五莲黑猪PRV、PCV、PPV 感染较严重，尤其是PCV，个别年份个体阳性率达到18%。PRV、PCV、PPV 是垂直传播疫病，能通过垂直传播感染下一代，难以根除，对保种构成较大威胁，应加以重视[6]。2 个五莲黑猪场均未检测到ASFV、CSFV、PRRSV，应继续做好防控。
3.3 不同代次感染情况
监测结果表明，日照市原种群病原感染率明显低于祖代和父母代，净化效果较好。由于父母代猪场从祖代引种，祖代猪场从原种场引种。因此，原种群疫病状况在动物疫病净化中起关键作用。如果原种猪场疫病不加以控制净化，将会通过引种传播到祖代和父母代猪场，给净化工作带来难度。因此，动物疫病净化要从源头入手，以原种场为抓手，消灭源头的传播，才能做好疫病防控[7]。
3.4 下步工作重点
经过3年持续监测，4 个种猪场均未检测到ASFV、CSFV，且猪瘟抗体水平超过70%，能够对猪群提供较好的保护。以上条件说明日照市种猪场具备开展ASF、CSF 净化条件。PRRS 在2020年1 个祖代场检出病原阳性，说明日照市种猪场仍存在风险。PRRSV 变异快，仅靠疫苗防控效果有限，需继续采取严格的生物安全措施和疫苗免疫措施控制[8]。监测结果表明，4 个种猪场PRV、PCV、PPV 目前感染严重，能引起母猪繁殖障碍，对猪群造成较大威胁，尤其是五莲黑猪的PRV、PCV、PPV 阳性感染率较高，对保种构成较大威胁，应作为后续净化的重点疫病。
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