刘 晟
(重庆市食品药品检验检测研究院化学室，重庆 401121)
氨曲南是由美国施贵宝制药有限公司研制的单酰胺环类β-内酰胺类抗生素，主要与细菌的青霉素结合蛋白3结合而抑制其细胞壁的合成，使细胞迅速溶解死亡。氨曲南对β-内酰胺酶高度稳定[1]，因而许多耐药菌对该药仍较敏感。本品抗菌谱主要为G-菌，抗菌效果与头孢他啶和庆大霉素相近，临床上主要用于治疗尿路感染、下呼吸道感染、血流感染、皮肤软组织感染(包括手术伤口感染、溃疡和烧伤创面感染)、腹膜炎等腹腔感染、生殖道感染等。氨曲南为国家基本药物，为保证其用药安全，重庆市食品药品检验检测研究院从安全性、有效性和质量可控性等方面对其进行了全面的质量评价，为药品质量的提高和监督管理提供技术依据。
1.1 仪器 Thermo Ultimate 3000 DGLC双三元高效液相色谱仪(美国赛默飞世尔科技有限公司)；
Agilent 7890型气相色谱仪、Agilent 7700X型电感耦合等离子体质谱仪(美国安捷伦科技有限公司)；
HACH TL2300型浊度仪(美国哈希公司)；
Binder KBFP240型恒温恒湿稳定性留样箱(德国Binder公司)；
XPE205DR型电子天平(瑞士梅特勒公司)。
1.2 试剂和药品 氨曲南原料药13批、注射用氨曲南29批(A、B和C公司)及原研制剂1批(规格1.0 g/支，批号AAX7824，美国施贵宝制药有限公司)；
氨曲南开环物(杂质A，批号1-LIJ-166-1)、开环脱硫基氨曲南(杂质B，批号9-VSB-47-2)、脱磺基氨曲南(杂质D，批号15-MAR-98-2，加拿大多伦多化学研究所)；
氨曲南E型异构体(杂质E，批号160303，加拿大Molcan公司)；
氨曲南乙酯(杂质F，批号2149-084A3，加拿大TLC药物标准品有限公司)。乙腈为色谱纯，水为纯化水，磷酸二氢钾和磷酸均为分析纯。
2.1 法定检验方法 按照《中华人民共和国药典》2015年版二部[2]进行法定检验。
2.2 探索性研究方法 为深入揭示药品内在品质，比较各企业产品质量差异，确保临床用药安全有效，进一步开展了有关物质、加速试验后溶液的澄清度、残留溶剂、重金属等4个方面的探索性研究。
2.3 法定检验结果
2.3.1 现行标准及分析 氨曲南原料药及注射用氨曲南的现行质量标准为《中华人民共和国药典》2015年版二部。
2.3.2 总体检验结果 对全部样品按法定标准检验，结果均符合规定，符合规定百分率为100%。进一步对与产品质量密切相关的主要检查项目如溶液的澄清度与颜色、有关物质、含量测定等结果进行统计分析。
2.3.3 溶液的澄清度 13批氨曲南原料药均未超过0.5号浊度标准液。注射用氨曲南有25批未超过0.5号浊度标准液，有4批超过0.5号浊度标准液，但均未超过标准要求的1号浊度标准液。
2.3.4 溶液的颜色 13批氨曲南原料药均未深于黄绿色2号标准比色液；
29批注射用氨曲南均未深于黄绿色4号标准比色液。全部42批样品均符合规定，合格率为100%。
2.3.5 有关物质 样品有关物质检验均符合规定。氨曲南原料药单个杂质的测定结果为0.2%～0.6%(相关标准规定不得超过1.5%)，平均值为0.5%；
总杂质的测定结果为0.6%～1.2%(相关标准规定不得超过3.5%)，平均值为1.1%。注射用氨曲南单个杂质的测定结果为0.3%～0.5%(相关标准规定不得超过1.5%)，平均值为0.4%；
总杂质的测定结果为0.6%～1.6%(相关标准规定不得超过5.0%)，平均值为1.2%。3家企业间比较，样品的最大单个杂质和杂质总量基本一致，3家企业生产工艺均为无菌分装，工艺简单，影响杂质水平的工艺参数相似，对杂质的控制水平相当。各规格间比较，杂质量基本一致，无统计学差异，其原因是各规格生产线、生产工艺相同，在原料杂质量相当的前提下，制剂生产过程中产生的杂质量基本一致。比较3家企业批间数据差异，B厂样品单个杂质和杂质总量基本一致，批间质量控制最好。其他2家企业有批间数据波动的情况，批间差异较大，提示应加强生产过程的质量控制，提高批间质量一致性。
2.3.6 含量 13批氨曲南原料药含量测定结果均符合规定，按无水物计算的含量测定结果为97.5%～98.0%(相关标准规定应为93.0%～103.0%)，含量基本一致，无统计学差异。29批注射用氨曲南含量测定结果均符合规定，按无水、无精氨酸物计算的含量测定结果为93.0%～100.2%(相关标准规定应为91.0%～103.0%)；
按平均装量计算的含量测定结果为标示量的95.4%～106.8%(相关标准规定应为标示量的90.0%～115.0%)，平均值为99.4%，极差11.4。提示各企业均应严格按照要求合理投料。
2.4 探索性研究结果
2.4.1 有关物质 分别采用《美国药典》40版[3]氨曲南有关物质测定方法和自行建立的有关物质测定方法对氨曲南原料药和注射用氨曲南进行测定,结果见表1、表2。结果显示，13批氨曲南原料药中氨曲南开环物(杂质A)和开环脱硫基氨曲南(杂质B)之和均<0.6%，脱磺基氨曲南(杂质D)均<0.7%，氨曲南E型异构体(杂质E)均<0.5%，氨曲南乙酯(杂质F)均<0.4%，各杂质总和均<3.5%。
表1 有关物质测定结果Table 1 Determination results of the related substances (%)
表2 按自拟有关物质测定方法测得的各杂质总和Table 2 The total impurities determined by the self-made method in the related substances (%)
29批注射用氨曲南中氨曲南开环物(杂质A)和开环脱硫基氨曲南(杂质B)之和均<0.6%，脱磺基氨曲南(杂质D)均<0.7%，氨曲南E型异构体(杂质E)均<0.5%，氨曲南乙酯(杂质F)均<0.4%，各杂质总和均<2.5%。
13批氨曲南原料中，部分企业产品的最大单个未知杂质超过0.1%，29批注射用氨曲南中部分企业产品的最大单个未知杂质超过0.2%。与原研制剂比较，虽然部分企业中已知杂质明显高于原研制剂，但均符合目前国内外药典的规定；
部分企业中最大单个未知杂质超过了0.2%，明显高于原研制剂，原研制剂未超过0.10%。
同时结果显示，《美国药典》40版氨曲南有关物质测定方法(等度洗脱)不能有效测定已知杂质F，导致已知杂质F未检出，也导致单个未知杂质检出率低，方法有缺陷。故采用自拟的HPLC法测定。色谱柱为Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.5)-乙腈(93∶7)混合溶液为流动相A，以0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.5)-乙腈(60∶40)混合溶液为流动相B，流速为1.0 ml/min，梯度洗脱(0～20 min,100%A;20～40 min,100%B;40～45 min,100%B;45～55 min,100%A)；
检测波长为270 nm；
柱温为30 ℃；
进样量为20 μl。
测定结果表明，A公司有1批氨曲南原料的最大单个未知杂质超过0.1%，测定结果为0.18%；
B公司有2批新生产的氨曲南原料以及2批近效期氨曲南原料的最大单个未知杂质超过0.1%，测定结果分别为0.53%、0.50%、0.53%、0.47%，均超过《美国药典》40版氨曲南单个未知杂质≤0.1%的规定。C公司有2批近效期注射用氨曲南最大单个未知杂质超过0.2%，测定结果分别为0.29%和0.21%；
B厂有6批注射用氨曲南以及2批近效期注射用氨曲南的最大单个未知杂质超过0.2%，测定结果分别为0.28%、0.26%、0.25%、0.26%、0.25%、0.25%、0.53%、0.41%。
2.4.2 溶液的澄清度及倒置加速试验 注射用氨曲南样品倒置加速试验条件：倒置于60 ℃恒温条件下，静置5 d后，按溶液的澄清度测定方法[4]用浊度仪测定。比较倒置前后溶液的澄清度变化情况。未经倒置加速的样品溶液的澄清度均低于1号浊度标准液，均符合规定。60 ℃倒置加速5 d后，浊度有增加的趋势，有2批超过了1号浊度标准液。倒置前样品浊度为(1.22±0.39) NTU，倒置后样品浊度为(1.72±0.58) NTU，倒置后样品浊度明显高于倒置前。同时将倒置加速前后样品的浊度进行配对秩和检验，其结果有显著性差异(P<0.05)。
2.4.3 残留溶剂 采用气相色谱(GC)法测定残留溶剂。根据合成工艺，采用顶空法测定甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷5种溶剂，色谱柱为DB-624型毛细管色谱柱，检测器类型为火焰离子化检测器，检测器温度为230 ℃，进样口温度为200 ℃，载气为氮气，流速2.0 ml/min，程序升温：初始温度40 ℃，维持时间为10 min，升温速率30 ℃，终止温度200 ℃，维持时间为3 min；
顶空进样：平衡温度为80 ℃，平衡时间为30 min，传输管温度为110 ℃。
二甲亚砜采用直接进样测定，色谱柱为DB-624型毛细管色谱柱，检测器类型为火焰离子化检测器，检测器温度为250 ℃，进样口温度200 ℃，载气为氮气，流速2.0 ml/min，程序升温：初始温度50 ℃，维持时间为5 min，升温速率1为20 ℃，终止温度180 ℃，维持时间为5 min，升温速率2为30 ℃，终止温度为230 ℃，维持时间为3 min。
结果A公司的氨曲南3批原料药中均检出丙酮和二甲亚砜残留，B公司的注射用氨曲南中检出了微量甲醇。
2.4.4 重金属 采用电感耦合等离子体质谱法测定砷、铅、汞、镉、铜、钡和镍。样品加硝酸后微波消解，用水定容。仪器选择干扰较小的氦碰撞模式，等离子气流量15.0 L/min，蠕动泵10 r/min，雾化室温度2 ℃，辅助气体和载气流量均为0.8 L/min，氦气流量5 ml/min，射频功率1550 W，跳峰扫描100次，采样深度8 mm，重复3次，积分时间0.20 s。样品中砷、铅、汞、镉等1类危害元素[5]和铜、钡、镍等重金属元素均低于各元素检出限，均未检出。
本次评价性抽验采用法定检验结合探索性研究模式，对国产氨曲南及注射用氨曲南制剂从质量评价标准到质量的现状、质量影响因素各方面进行了较全面的分析和评价。由法定检验可知，42批样品按现行标准检验，合格率为100%，可以认为目前上市的氨曲南及注射用氨曲南的生产工艺较成熟，总体质量情况较好，质量标准基本可行。
探索性研究发现如下问题。国家药品监督管理局颁布的“化学药物杂质研究的技术指导原则”规定，原料药最大日剂量不超过2 g时，杂质的鉴定限度为0.10%或1.0 mg(取最小值)，质控限度为0.15%或1.0 mg(取最小值)；
制剂最大日剂量为10 mg～2 g时，杂质的鉴定限度为0.2%或2 mg(取最小值)，最大日剂量为100 mg～2 g时，杂质的质控限度为0.2%或2 mg(取最小值)。A、B和C公司部分样品最大单个未知杂质测定结果均超过该指导原则的限度值，而且原研制剂最大单个未知杂质测定结果为0.08%。因此，建议氨曲南药品生产企业改进合成以及生产工艺，降低未知杂质的含量，提高产品质量，与原研制剂的杂质水平保持一致或更优。
倒置加速后的注射用氨曲南样品浊度明显高于未倒置的样品，说明在倒置加速过程中，主药与胶塞发生相互作用造成了澄清度变差。因此，各生产企业应加强主药与胶塞的相容性研究，使用覆膜胶塞或不与主药发生相互作用的胶塞进行包装，确保临床使用药品的安全性。
A公司在氨曲南的合成路线中使用了丙酮和二甲亚砜，且在其3批原料药中均检出丙酮和二甲亚砜残留。这两种溶剂属于《中华人民共和国药典》2015年版四部通则规定需要控制的第三类溶剂，有一定的风险隐患。虽然3批样品测得的残留量远低于规定限度，但企业还是应加强丙酮和二甲亚砜残留量的研究和考察，建立定期监测制度，并进行长期数据收集，尽量避免溶剂残留带来的风险。B公司生产的注射用氨曲南中检出了微量甲醇，提示企业应加强生产过程控制，查找原因，尽量避免不明有机溶剂的引入。
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